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流式檢測
一、項(xiàng)目介紹
流式細(xì)胞術(shù)是運(yùn)用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞或顆粒進(jìn)行光譜鑒定、細(xì)胞分選、計(jì)數(shù)，廣泛用于分析細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)分子的表達(dá)水平、鑒定樣品中細(xì)胞群的不同細(xì)胞類型、評估各細(xì)胞亞群的純度以及分析細(xì)胞大小和內(nèi)含顆粒。主要利用熒光標(biāo)記的抗體檢測蛋白水平，或結(jié)合了特定細(xì)胞分子的熒光染料，如PI與 DNA 的結(jié)合。
二、應(yīng)用
常用于細(xì)胞表面分子如表面標(biāo)記物的鑒定及水平分析，以鑒定、定性或定量特定類群的細(xì)胞，可以檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)水平，可以利用特定染料分析細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡，利用線粒體電位染料分析線粒體膜電位，利用DHE等染料檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平。
三、流式細(xì)胞儀通道
流式細(xì)胞儀Beckman Coulter CytoFLEX；光學(xué)參數(shù)：FSC（前散射）、SSC（側(cè)散射）、4色熒光通道；數(shù)據(jù)采集軟件：CytExpert。
| 激發(fā)波長 | 通道 | 發(fā)射波長 | 常見染料 |
| 488 nm | FL1 | 525±20 nm | FITC、EGFP、CFSE、AlexaFluor 488 |
| FL2 | 585±21 nm | PE、PI、DsRed | |
| FL3 | 690±25 nm | PerCP-Cy5.5、PC5 | |
| 638 nm | 660±10 nm | APC、Alexa Fluor 647 | |
四、結(jié)果展示
細(xì)胞周期
細(xì)胞凋亡
ROS檢測
JC-1線粒體膜電位
五、樣品保存運(yùn)輸
1、流式樣本接收注意事項(xiàng)
?、偌?xì)胞凋亡
需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。如果細(xì)胞帶熒光，一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注，否則按照無熒光處理。如果因此導(dǎo)致檢測結(jié)果不可用及樣本浪費(fèi)，我方概不負(fù)責(zé)，也不接受退單。
?、诩?xì)胞周期
周期需要細(xì)胞量比較多，6 孔板送樣要求匯合度在70%以上，但不能超過90%。外地樣品，需用預(yù)冷的70% 乙醇固定過夜后（貼壁細(xì)胞需要消化后進(jìn)行固定），離心棄固定液，加1ml PBS重懸，封口膜封好，4℃運(yùn)輸寄到實(shí)驗(yàn)室。
③流式JC-1
需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板)，多提供2 個(gè)空白孔，做陰性和陽性對照。如果細(xì)胞帶紅光或綠光，不能檢測。
?、?nbsp;流式ROS
需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板)，多提供2 個(gè)空白孔，做陰性和陽性對照。如果細(xì)胞帶綠光，不能檢測。
?、菁?xì)胞表抗
提前確定公司是否有相應(yīng)流式抗體(組化抗體不可用)，其他抗體需要客戶自己提供(外地樣本不接)。
?、?nbsp;流式三標(biāo)
提前告知樣本具體數(shù)量和類型(血液或脾臟~)。血樣用抗凝管收集(胞內(nèi)染色至少需要1.5 ml，表抗需要約1 ml)，注意防止凝血，4℃保存運(yùn)輸。血樣4℃保存最多只能存放一周，時(shí)間越久實(shí)驗(yàn)結(jié)果越差。取血后，需盡快寄到實(shí)驗(yàn)室;取脾臟時(shí)盡量將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室，直接在實(shí)驗(yàn)室取材后開始實(shí)驗(yàn)，若不能將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室，取材(整個(gè)脾臟)后將組織放在含有PBS 的EP 管或離心管中，4℃保存，提細(xì)胞必須在取材后6 小時(shí)以內(nèi)完成，注意有些檢測指標(biāo)(Treg,TH1, TH2 等)需無菌提取。外地樣本不接。