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問題
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原因
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解決方案
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邊緣效應(yīng)
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組織邊緣貼附不牢，邊緣組織松脫漂浮于液體中
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APES/多聚賴氨酸處理玻片；組織切片盡量??；盡量避免選用壞死較多的組織
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試劑未充分覆蓋組織
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滴加試劑時(shí)讓試劑完全覆蓋組織
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非特異性染色體
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抗體質(zhì)量問題
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使用質(zhì)量有保證的抗體
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抗體孵育時(shí)間長
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減少孵育時(shí)間
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抗體濃度過高
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降低抗體濃度
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一抗為多抗
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使用單克隆抗體
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內(nèi)源性過氧化物酶及生物素
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延長滅活時(shí)間
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封閉不足
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延長封閉時(shí)間
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DAB孵育時(shí)間過久或濃度過高
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按說明書配置試劑，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間
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抗體孵育后洗滌不充分
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每次孵育之后洗3*5次
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滴加試劑時(shí)干片
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及時(shí)滴加試劑
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切片在緩沖液中浸泡過久
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抗原修復(fù)之后及時(shí)封閉加一抗，不能過夜
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陰性結(jié)果
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抗體濃度及質(zhì)量
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選擇有質(zhì)量保證的抗體，先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索抗體使用濃度
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抗原修復(fù)不全
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摸索合適的抗原修復(fù)方式及修復(fù)時(shí)間
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抗原豐度
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正常陰性
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封閉時(shí)間過長
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減少封閉時(shí)間
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DAB孵育時(shí)間短
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鏡下控制顯色時(shí)間
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細(xì)胞通透不全，抗體未能進(jìn)入細(xì)胞反應(yīng)
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選擇合適的通透劑及其反應(yīng)時(shí)間
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一抗二抗不匹配
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選擇正確來源的二抗
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脫片
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玻片未處理好
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玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理
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切片厚薄不均勻
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更換刀片；調(diào)整好切片機(jī)狀態(tài)
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烤片時(shí)間或溫度不夠
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60攝食度2小時(shí)
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組織自身問題
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腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片
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抗原修復(fù)時(shí)溫度迅速變化
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抗原修復(fù)后讓其自然冷卻
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操作時(shí)用力過猛
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有脫片嫌疑的切片不要用力甩，用吸水紙吸干殘余液體
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染色弱
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抗體濃度低，孵育時(shí)間短
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提高抗體濃度，延長反應(yīng)時(shí)間
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試劑使用超過有效期
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試劑定時(shí)更新
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滴加試劑時(shí)殘余緩沖液過多使試劑稀釋
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滴加試劑前盡量減少殘余液體
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封閉過度
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減少封閉時(shí)間
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著色不均勻
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切片厚度不一致
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更換刀片；調(diào)整好切片機(jī)狀態(tài)
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試劑配制未混勻使局部濃度不一致
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試劑充分混勻后滴加
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試劑未完全覆蓋組織
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滴加試劑時(shí)讓試劑完全覆蓋組織
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脫蠟不完全
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更換脫蠟劑或延長脫蠟時(shí)間
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