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斑馬魚晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA實驗操作手冊
AGES就是糖基化終末產(chǎn)物的英文簡寫，它是非酶糖基化反應(yīng)(Maillard反應(yīng))的終末產(chǎn)物。是指蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸等大分子在沒有酶參與的條件下，自發(fā)的與葡萄糖或其他還原單糖反應(yīng)所生成的穩(wěn)定的共價加成物。本試劑盒用于測定斑馬魚血清，血漿及相關(guān)液體樣本中晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)含量。那么在ELISA實驗中有哪些注意事項呢，恒遠生物小編為大家總結(jié)ELISA實驗操作注意事項。
一、實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中斑馬魚晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)水平。用純化的斑馬魚晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)，再與HRP標(biāo)記的晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準曲線計算樣品中斑馬魚晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)濃度。
二、標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
三、注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標(biāo)準曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
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