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生化試劑盒
- 還原糖含量試劑盒-可見分光光度法
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測定原理：
加熱促進堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征吸收峰；在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖含量與540nm吸光度成線性關系，根據(jù)標準曲線，即可求出樣品中還原糖的量。
| 中文名稱 |
還原糖含量試劑盒 |
| 規(guī)格 | 48樣 |
| 貨號 |
E-316-SH |
| 價格 | ￥500 |
| 樣本類型 | 血清，血漿，組織勻漿，細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液等 |
| 檢測范圍 | 詳見說明書 |
| 檢測方法 |
可見分光光度法 |
| 貨期 | 3-5天 |
| 說明書 | 咨詢我司業(yè)務員獲取 |
| 文獻 |
咨詢我司業(yè)務員獲取 |
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。植物體內(nèi)的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等，是最常見的單糖和雙糖，其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物，也是進一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。
測定原理：
加熱促進堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征吸收峰；在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖含量與540nm吸光度成線性關系，根據(jù)標準曲線，即可求出樣品中還原糖的量。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：15mL×1瓶 ，4℃保存；
樣品中還原糖的提取：
1、細菌或細胞的處理：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議1000萬細菌或細胞加入2mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復30次），轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。
2、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g組織，加入2mL試劑一），冰浴勻漿，轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。
3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.2mL血清（漿）加入2mL試劑一），冰浴勻漿，轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。
測定步驟：
1、 分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。
3、 在EP管中加入下列試劑：
|
試劑（μL） |
對照管 |
測定管 |
|
樣本 |
700 |
700 |
|
試劑二 |
|
500 |
|
蒸餾水 |
500 |
|
將各管搖勻，在95℃水浴中加熱5min（蓋緊，防止水分散失），取出后立即冷卻至室溫，混勻。在540nm波長下讀取對照管和測定管吸光值。計算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。
注意：如果ΔA大于2，需要將樣本用試劑一稀釋，計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)（若顯色后出現(xiàn)分層現(xiàn)象，可改用蒸餾水稀釋）。
還原糖含量計算：
1、標準條件下測定回歸方程為y = 8.3796x- 0.3034；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、按樣本鮮重計算：
還原糖(μg/g鮮重)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷W
3、按樣本蛋白濃度計算：
還原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷Cpr
4、按細菌或細胞密度計算：
還原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（1000×V1÷V2）=0.239×(ΔA＋0.3034)
5、按血清（漿）體積計算：
還原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（V3×V1÷V2）=1193.4×(ΔA＋0.3034)
1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入樣本體積，0.7mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿體積），0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000：細菌或細胞總數(shù)，1000萬。
注意：最低檢測限為1mg/g鮮重或10μg/mg prot
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